簡(jiǎn)介：

　　質(zhì)粒轉(zhuǎn)化：攜帶外源DNA片段的質(zhì)粒進(jìn)入感受體細(xì)胞后，在細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制。多用于后期提取質(zhì)粒。

　　質(zhì)粒提取：即去除 RNA，將質(zhì)粒與細(xì)菌基因組DNA分開(kāi)，去除蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì)，以得到相對(duì)純凈的質(zhì)粒。目前實(shí)驗(yàn)室涉及較多的為大量提取和小量提取。

　　實(shí)驗(yàn)步驟：(以質(zhì)粒樣本提取大量質(zhì)粒為例)

　　1. 從-80℃冰箱中取出對(duì)應(yīng)的感受態(tài)細(xì)胞，室溫下置于冰盒上解凍，標(biāo)記;

　　2. 向感受態(tài)細(xì)胞中加入2µl的質(zhì)粒，置于4℃冰箱中,冰浴30min;

　　3. 在42℃水浴鍋中熱激90s，然后立即在冰盒上放置2min;

　　4. 每管加1mL LB培養(yǎng)基，37℃搖床震蕩,220rpm×30min;

　　5. 取100µl 轉(zhuǎn)化液加入對(duì)應(yīng)抗性的平板中，倒入適量玻璃珠，涂勻液體;

　　6. 將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。

　　7. 挑選克隆子接種于1mL含對(duì)應(yīng)抗性的LB液體培養(yǎng)基，37℃，220rpm振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。

　　8. 按1/1000的比例，接種于200mL對(duì)應(yīng)抗性的LB液體培養(yǎng)基，37℃，220rpm振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。

　　9. 4℃下8000rpm離心收集菌體，用無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒提取質(zhì)粒。

　　實(shí)驗(yàn)周期：7個(gè)工作日

　　實(shí)驗(yàn)要求：甘油菌50ul;質(zhì)粒樣品，20ng/ul，20ul。干冰運(yùn)輸。

　　注明甘油菌和質(zhì)粒的抗性。