標本要求：組織、細胞、

　　實驗周期：1-2周

　　收費價格：每個樣品每個基因250元，每個基因2對引物費2*70元

　　產(chǎn)品介紹：亞硫酸氫鹽處理后測序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是檢測基因甲基化的經(jīng)典方法,其原理為:用亞硫酸氫鈉修飾處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞密啶(c)被轉(zhuǎn)化為尿密啶(U)而甲基化的胞嘧啶則不變。據(jù)此設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物,如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,則說明該位點存在甲基化反之,說明被檢測的位點不存在甲基化。若兩隊引物均能得到陽性PCR產(chǎn)物,則說明該片段部分甲基化。

　　實驗流程：

　　(1) 樣本接收:組織、細胞、血液、其它

　　(2) 實驗步驟: DNA提取-亞硫酸氫鹽處理-純化DNA-PCR擴增-電泳

　　(3)實驗結(jié)果:完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實驗結(jié)果)

　　注意事項:

　　1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或-80度保存,組織不少于100mg,

　　2、培養(yǎng)細胞:通過細胞計數(shù)取不少于2×10⁶個細胞于EP管,收集細胞沉淀后,液氮速凍,低溫保存或運輸(-80℃,避免反復凍融);

　　3、血液標本:以抗凝管保存血樣(-4℃保存3~5天,如果要長時間保存需放在-80℃);

　　4、DNA樣品需標明濃度和純度(體積≥50u,濃度≥ 50 ng/ul);

　　5、樣本運輸:可選擇以下任何一種方式高送標本

　　　a組織樣本、細胞樣本以干冰運輸;

　　　b.細胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出);

　　6、提供詳細的基因信息, MSP方法的擴增序列在140bp左右。我們會根據(jù)客戶的基因序列信息設計引物,并在方案實驗過程中隨時與客戶溝通。