簡(jiǎn)介：熒光定量PCR是通過(guò)熒光染料(SYBR Green)或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線(xiàn)監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度?？梢杂糜跈z測(cè)mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA的基因表達(dá)水平。最終所得的PCR產(chǎn)物可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)一步驗(yàn)證引物特異性。

　　實(shí)驗(yàn)流程：

　　1.接收樣本

　　2.組織勻漿、細(xì)胞和血液樣本吹打裂解-RNA提取-RNA濃度測(cè)定—逆轉(zhuǎn)錄成cdna—熒光定量PCR-(PCR產(chǎn)物電泳)-數(shù)據(jù)分析

　　其中mRNA為普通逆轉(zhuǎn)錄，lncRNA可選采取普通和特異性逆轉(zhuǎn)錄，circRNA和miRNA采取特異性逆轉(zhuǎn)錄

　　3.交付結(jié)果：完整項(xiàng)目報(bào)告(擴(kuò)增曲線(xiàn)、數(shù)據(jù)分析、引物信息、實(shí)驗(yàn)報(bào)告)

　　實(shí)驗(yàn)周期：60個(gè)循環(huán)內(nèi)，7個(gè)工作日內(nèi)出結(jié)果

　　樣品要求：

　　1、組織： 100mg(黃豆大小)，最少50mg(綠豆大小)，脂肪組織，結(jié)締組織，纖維化組織適當(dāng)增加。

　　2、細(xì)胞：1×10^6個(gè)細(xì)胞,貼壁細(xì)胞舒展，未變圓;

　　3、全血：2mL，最少1mL新鮮血液EDTA抗凝管;

　　4、血清：2mL，干冰運(yùn)輸;

　　5、植物：葉、果肉、種子等需100mg，最少50mg。

　　6、RNA樣品：純度OD260/280 比值為1.8-2.0，濃度≥500ng/ul，體積≥20ul。

　　7、cdna：cdna原液20uL。

　　樣本運(yùn)輸：可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本

　　1.動(dòng)植物組織樣本、細(xì)胞樣本、血清、RNA、cDNA以干冰運(yùn)輸;

　　2.細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、灌滿(mǎn)培養(yǎng)液不漏出)，常溫運(yùn)輸;

　　3.全血樣本是EDTA抗凝管4度運(yùn)輸。